В качестве микроорганизма используемого для синтеза инсулина используют E. Coli, в которой воссоздают последовательность ДНК по аминокислотной последовательности инсулина, раздельно синтезируя искусственные гены его А- и В- цепей. На 5- конце каждого из них располагается кодон метионина (который в синтезированном конце является N-концевым), а на 3- конце – терминирующие последовательности. Каждый из генов встраивается в ген В-галактозидазы плазмид, а их в свою очередь вводят в клетки E. Coli. Поскольку бактерии растят на среде с галактозой, а не с глюкозой, то в них индуцируется синтез В-галактозидазы, а вместе с ней – А- и В- цепей инсулина, присоединенных через остаток метионина.
После лизиса бактерий и обработки бромцианом. который специфически расщепляет белки по остатку метионина, цепи инсулина отделяют от В-галактозидазы. Затем проводят очистку цепей и их объединение, в результате чего образуется нативный двухцепочечный инсулин.
Иногда получают неактивный проинсулин, а затем с использованием трипсина проводят высщепление С-пептида с образование активного инсулина.
+Ферментативные среды должны содержать галактозу потому что она более интенсивному синтезу В-галактозидазы, а в месте с ней А- и В- цепей инсулина. Лактоза добавляется в среды как дополнительный источник энергии для бактерии. Она постепенно усваивается микроорганизмом, не вызывая катаболитную репрессию, как глюкоза. Так высвобождающаяся при гидролизе лактозы глюкоза репрессирует бетагалактозидазу, в результате чего гидролиз лактозы (и появление в среде глюкозы) замедляется. В результате количество инсулина (вторичного метаболита) увеличивается.
Объяснение:
Популярные вопросы